T细胞高效扩增试剂盒

【产品名称】T 细胞高效扩增试剂盒
【产品货号】664070
【产品概述】
1. 本产品是一款T 细胞高效扩增的试剂盒。外周血/脐带血中的PBMC 细胞经本试剂盒处理后，在14-16 天时间内，细胞总数可达到8×10⁹-1×10¹⁰，细胞存活率90%以上，扩增倍数在500-1000倍，T 细胞比例最高可达90%以上。
2. 本试剂盒适用于人外周血/脐带血和经过血细胞单采仪处理获得的白细胞等来源的样品。
3. 本试剂盒是在符合相关规范的无菌环境中生产，并已通过了严格的细菌、真菌、支原体、病毒（HIV、HAV、HBV、HCV）、内毒素检测。本试剂盒不含血浆、动物源成分以及其它不明确成分。

【试剂盒套装组成】

套装内容	单位	数量	保存条件	产品性状
T Cell Culture Medium（664071）	瓶	2	2-8℃	液体
T-A（664072）	支	1	-20℃	液体
T-B（664073）	支	1	-20℃	液体
T-C（664074）	支	2	-20℃	冻干粉

【用户需要自行准备的试剂耗材】
0.4%苔盼蓝溶液、生理盐水、人淋巴细胞分离液、肝素钠采血管/100ml 采血袋、PBS、75cm2 悬浮培养瓶、175cm2 培养瓶、细胞培养袋（NIPRO）、15mL/50mL/250mL 离心管、移液管、5mL 和50mL无菌注射器等。

【样本采集及运输要求】

1. 外周血样本采集应为肝素钠/肝素锂采血管，脐带血优先选择100ml 采血袋，采集过程应严格规范无菌。实际采血总量应大于50ml，采集后血液与抗凝剂应及时混匀。
2. 样本运输条件为18-25℃，24 小时处理样本。

【PBMC 的分离和血浆制备（以50ml 样本THERMO ST16 离心机为例）】

1. 将50ml 血液样本均分至2 个50ml 离心管，3000rpm，10min，取上层血浆转移至新的离心管，56℃，30min 灭活，4℃静置10min，3000rpm，10min，用吸管将上清液转移至新的离心管，-20℃保存，使用前取出；
2. 剩下细胞加入生理盐水至原体积，充分混合均匀，转移至2 个装有15ml 淋巴细胞分离液的50ml离心管中，室温下1800rpm，30min；
3. 取出PBMC 至新的50ml 离心管；加入生理盐水至45ml，1600rpm，8min；
4. 去上清，加入生理盐水至45ml，充分混匀，取样计数；
5. 1400rpm，10min 收集PBMC。

     【培养基使用说明】

             每瓶培养基｛T Cell Culture Medium (664071)｝加入一支T-C (664074)，混匀，使用前恢复至室温。

     【细胞接种】

1. 取45ml 已配置培养基加入5ml 自体血浆（不含抗凝剂体积）和一支T-A (664072)混匀待用。
2. 用混匀后的培养基重悬已经收集好的单个核细胞；细胞密度应大于1.5×10⁶cell/ml；
3. 转移混匀后的细胞悬液至悬浮细胞培养瓶，在缓慢平放于培养箱中培养。
4. 24 小时候后加入一支T-B (664073)。

     【补液】

1. D3，镜下观察有较多克隆团出现，即可补液，如有大量较大的克隆团，可适当打散（下同），转移细胞至T175 培养瓶中，补加45ml 已配置培养基，5ml 自体血浆混匀；
2. D5，补加110ml 已配置培养基，自体血浆10ml，混匀；
3. D7，补加200ml 已配置培养基和10ml 自体血浆，混匀；均分于2 个细胞培养袋；
4. D9，往细胞培养袋补加400ml 已配置培养基和10ml 自体血浆，混匀，均分于2 个细胞培养袋；自体血浆如用完可不添加或用Cell Culture Supplemental Mix（Special For Immune Cells；666072）替代（下同）；
5. D11，往细胞培养袋补加800ml 已配置培养基和10ml 自体血浆，混匀，均分于2 个细胞培养袋；
6. D13，往细胞培养袋补加400ml 已配置培养基和10ml 自体血浆，混匀，均分于2 个细胞培养袋；

     【收获】

              D14 收获T 细胞，可根据实验情况，适当提前或延迟。