CIK细胞高效扩增试剂盒套装

【产品名称】CIK细胞高效扩增试剂盒套装

【产品组成】套装货号：662070

套装内容	数量	单位	保存条件	产品性状
CIK Cell Culture Medium（662071）	2	瓶	2-8℃	液体
CIK-A（662072）	1	支	-20℃	液体
CIK-B（662073）	1	支	-20℃	液体
CIK-C（662074）	1	支	-20℃	冻干粉
CIK-D（662075）	1	支	-20℃	冻干粉

【产品介绍】
      本产品是一款 CIK 细胞高效扩增的试剂盒。外周血/脐带血中的 PBMC 细胞经本试剂盒处理后， 在 14-16 天时间内，细胞总数可达到6×10⁹- 8×10⁹，细胞存活率95%以上，扩增倍数在500-1000 倍，CIK 细胞比例最高可达90%以上。
      本试剂盒适用于人外周血/脐带血和经过血细胞单采仪处理获得的白细胞等来源的样品。
      本试剂盒是在符合相关规范的无菌环境中生产，并已通过了严格的细菌、真菌、支原体、病毒（HIV、HAV、HBV、HCV）、内毒素检测。本试剂盒不含血浆、动物源成分以及其它不明确成分。

【用户需要自行准备的试剂耗材】
      0.4%苔盼蓝溶液、生理盐水、人淋巴细胞分离液、肝素钠采血管/100ml 采血袋、PBS、75cm2悬浮培养瓶、175cm2 培养瓶、细胞培养袋、15mL/50mL/250mL 离心管、移液管、5mL 和 50mL无菌注射器等。

【样本采集及运输要求】

1. 外周血样本采集应为肝素钠采血管，脐带血优先选择 100ml 采血袋，采集过程应严格规范无菌。实际采血总量应大于 50ml，采集后血液与抗凝剂应及时混匀。
2. 样本运输条件为 18-25℃，24 小时处理样本。
   

【PBMC 的分离和血浆制备（以 50ml 样本 THERMO ST16 离心机为例）】

1. 将 50ml 血液样本均分至2个 50ml离心管，3000rpm，10min，取上层血浆转移至新的离心管，56℃，30min 灭活，4℃静置 10min，3000rpm，10min，用吸管将上清液转移至新的离心管中，- 20℃保存，使用前取出；
2. 剩下细胞加入生理盐水至原体积，充分混合均匀，转移至2个装有15ml淋巴细胞分离液的50ml离心管中，室温下1800rpm，30min；
3. 取出 PBMC 至新的 50ml 离心管；加入生理盐水至45ml，1600rpm，8min；
4. 去上清，加入生理盐水至 45ml，充分混匀，取样计数；
5. 1400rpm，10min 收集 PBMC。
   

【培养基使用说明】
      单独取 40ml 培养基用于第一次接种；
      第一瓶培养基｛CIK Cell Culture Medium (662071)｝加入一支 CIK-C (662074)，混匀，使用前恢复至室温；
      第二瓶培养基｛CIK Cell Culture Medium (662071)｝加入一支 CIK-D (662075)，混匀，使用前恢复至室温；
      现用现配。
【细胞接种】

1. 取 40ml 培养基（不加 CIK-C)加入 CIK-A (662072)和 5ml 自体血浆混匀待用。
2. 用混匀后的培养基重悬已经收集好的单个核细胞，细胞密度应大于 1.5×10⁶cell/ml；
3. 转移混匀后的细胞悬液至悬浮细胞培养瓶，在缓慢平放于培养箱中培养。
   
4. 24 小时后加入一支 CIK-B (662073)，混匀。
   

【补液】

1. D3（72h），镜下观察有较多克隆团出现，即可补液，如有大量较大的克隆团，可适当打散（下同）， 转移细胞至 T175 培养瓶中，补加 40ml 已配置培养基，5ml 自体血浆混匀；
2. D5，补加 100ml 已配置培养基，自体血浆 10ml，混匀；
3. D7，补加 200ml 已配置培养基和 10ml 自体血浆，混匀；
4. D9，往细胞培养袋补加 400ml 已配置培养基和 10ml 自体血浆，混匀，均分于 2 个细胞培养袋； 自体血浆如用完可不添加或用细胞营养添加物替代（下同）；
5. D11，往细胞培养袋补加 800ml 已配置培养基和 10ml 自体血浆，混匀，均分于 2 个细胞培养袋；
6. D13，往细胞培养袋补加所有剩余已配置培养基和 10ml 自体血浆，混匀，均分于 2 个细胞培袋；
   

【收获】
       D15 收获 CIK 细胞，可根据实验情况，适当提前或延迟。